作者：Zichuang Zhang, Jing Li, Chengqi Zhang, Xue Bai*, Tie Zhang *

刊物名称：Animals (Basel)

发表年份：December 2024

摘要内容：猫杯状病毒（FCV）是全球家猫中最常见的病毒性病原体之一，主要引起猫科动物上呼吸道感染，严重威胁猫的健康。因此，建立一种快速检测方法以有效控制和预防FCV的传播具有重要意义。为构建Cas13a-RAA-LFD反应体系，本研究基于FCV相对保守的序列，分别设计了添加T7启动子的重组酶辅助扩增（RAA）引物和CRISPR RNA（crRNA）。只有当crRNA识别靶序列时，Cas13a蛋白才会切割报告探针，结果可通过侧向流动试纸条（LFD）直接观察。为评价该体系，本研究优化了RAA扩增时间、Cas13a蛋白浓度、crRNA浓度及CRISPR反应时间等参数，并将该方法与聚合酶链反应（PCR）琼脂糖电泳法在临床样本中的检测符合率进行比较，以评估其可靠性。结果表明，Cas13a-RAA-LFD方法能够有效扩增靶基因，结果可通过LFD直观判读。该方法具有高度的特异性，与猫细小病毒（FPV）、猫冠状病毒（FCoV）和猫疱疹病毒（FHV）等其他常见猫科病毒无交叉反应。该方法的灵敏度极高，经验证最低可检测至100拷贝/μl的病毒核酸。本研究还验证了该方法具有良好的重复性和稳定性。临床样本检测结果显示，其临床检测符合率达到96.39%。综上所述，本研究建立了一种简便、高效、准确且可视化的FCV检测方法，可用于FCV的早期防控。

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原文链接：https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11727533/